艾美捷科技:用免疫荧光找特定蛋白在哪儿

在搞生命科学研究的时候,特别是细胞生物学、分子生物学还有病理学这一块儿,大家都爱用免疫荧光技术来找特定蛋白在哪儿,表达量咋样。这时候挑二抗可太关键了,它直接决定了实验的灵敏、准不准还有信不信得过。艾美捷科技这次代理的杰克逊公司产品“Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Rb,Shp Sr Prot)”,货号是JAC-715-545-150,就是一款专门用来把低丰度靶标给“揪”出来的利器。 这东西其实就是用Alexa Fluor 488把羊抗小鼠IgG二抗给标记上的,专门针对小鼠IgG的重链(H)和轻链(L)。它的“min X”这一点挺重要,说明经过了严格纯化,把牛、绵羊、山羊、猪、马、兔、豚鼠、雪貂、猩猩这些乱七八糟的成分都给清掉了。这么一来背景干扰就少了好多,信噪比自然也就高了。 咱们先说说这个Alexa Fluor 488有多厉害。这玩意儿亮度特别高,光稳定性也强,发射波长大概是519 nm,属于绿色荧光。跟那个常用的FITC比起来,它的亮度更高,激发/发射的波长范围也更宽,特别适合做多色标记。而且它耐光,长时间曝光都没事,照出的图像清楚稳定,显微镜成像和流式细胞术这种事儿都用得上。 再看AffiniPure 这个技术,那是杰克逊公司的独门秘籍。他们通过亲和层析啥的一大堆步骤把杂蛋白全给筛出去了,保证了抗体的纯度和均一性。这样一来背景信号就低了,灵敏度就上去了。做复杂样本分析或者多重标记的时候,这技术特别管用。 最重要的是它不怎么跟别的物种的血清蛋白起反应。因为标注了“min X”,所以哪怕样本里混进了别的动物的蛋白也没事。这对做多物种研究或者跨物种比较的朋友来说简直太省心了。 不光是看显微镜能用,Western blot、ELISA、流式细胞术这些实验也都能沾光。它属于那种实验室里到处都能用上的通用型二抗。 具体怎么用呢?在细胞里找蛋白在哪儿分布啊,在组织切片上看蛋白表达啊,用流式细胞术测细胞表面或里面的蛋白水平啊,还有做多色荧光标记啊,这都是它的强项。用的时候最好根据实验目的选个合适的稀释比例,先做个预实验找找感觉。