要想搞清楚神经肌肉接头处的nAChR分布情况,咱们可以试试用AF350标记的α-BTX。这个AF350是Alexa Fluor 350的简称,专门用来标记细胞膜。它是从台湾银环蛇的毒液里提取出来的,属于长链α-神经毒素家族。这种毒素有5个二硫键,把它的三维结构稳定住了,耐热又耐化学,放冰箱里冻上好久都没事。它专门找Loop II上的芳香族残基形成的疏水口袋下手,就像找钥匙开锁一样,特别专一地去识别nAChR。 这种AF350标记的荧光染料发射蓝色光,用蓝光激发就好使。它比传统的FITC耐用多了,能长时间观察细胞动态。这玩意儿还挺随和,在pH4到10的范围里都能稳得住。 厂家给了好几种规格的包装,像10毫克、25毫克或者50毫克的都有。大家可以直接找西安凯新生物科技有限公司的wudong定制想要的规格。平时保存得注意避光、干燥,还不能老冻着再化冻。 除了在神经肌肉接头那儿定位nAChR的分布,咱们还能靠它来追踪活细胞里nChR的内吞和外排过程。要是在中枢神经系统里做研究,标记胆碱能神经元上的nChR,就能看清它们在海马体、纹状体这些地方是怎么连在一起的。 另外像FRAP这种技术也能用得上,通过漂白荧光然后看恢复的快慢来算受体在脂筏微区扩散的速度。要是想筛药或者做受体结合实验,拿AF350-α-BTX当探针挺不错的。跟别的化合物一起孵育完再测荧光强度或者用流式细胞术分析一下就行了。 至于免疫沉淀或者Western blot这些实验,AF350-α-BTX还能帮忙富集nChR。另外像FD-1080、Me-Tetrazine、Hyaluronate FITC这些也都是好东西。Cyanine5-LPS和sulfo-Cyanine5 streptavidin这些也能一起用。IGC-Osu和Sulfo-Cyanine3-SH也是常备的试剂。5-TAMRA cadaverine和Amino Phalloidin还有Cell-Tracker Red CMTPXAF488 WGA也都在列。Cyanine3-Sambucus Nigra Lectin和FITC-Protein A也能搭配着用。 总之这一大堆相关的试剂最好都放在阴凉避光的地方存着,专门留着搞科研用就行啦。