最近我在整理实验室里的各种血清铁检测试剂盒。这种试剂盒通常采用分光光度法,一次能做50管样品,也就说给48个样本用。使用前,咱们最好挑2到3个预期差异大的样品先做个预测试。这是因为血清铁指的是血液中转铁蛋白结合的铁,这个指标对区分缺铁性和非缺铁性贫血非常重要。 测定的原理是:亚硫酸钠会把血清里的Fe3+还原成Fe2+,Fe2+再和2, 2’-联吡啶结合显色。在520nm波长处测量光吸收值就能算出血清铁含量了。 准备工作时需要的仪器有:可见分光光度计、离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。 试剂组成和配置方面,试剂一和二都是粉剂,需要4℃保存。临用前把试剂一加20mL蒸馏水溶解好就行;试剂二则是加625μL冰醋酸再加20mL蒸馏水溶解。标准液是1mL一支的EP管,浓度是10μmol/L Fe3+。 不同批次的试剂盒成分不能混用,校准品和质控品的数值也只能在本批次内用。 生化试剂盒其实挺多分类的。第一种是代谢物检测,比如血糖、甘油三酯、胆固醇(TC)、尿酸这些小分子。原理大多是终点比色法或者速率比色法。比如血糖检测用的是葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化物酶(POD)反应生成有色物质。 第二种是酶活性检测试剂盒,像SOD、CAT、POD、LDH、ALT、AST这些酶都能用。主要用速率法监测底物或产物的吸光度变化速率来计算单位。比如SOD检测用的氮蓝四唑(NBT)光还原法。 第三种是蛋白定量试剂盒,有BCA法、Bradford法还有Lowry法。其中微量BCA适合样本少的情况。BCA法是碱性条件下蛋白和铜离子结合还原试剂产生紫色复合物。 最后一种是离子检测试剂盒,用来测钙磷钾钠这些无机离子。比如钙检测是通过它和偶氮砷Ⅲ结合显色来定量的。