无rnase的1m dtt 溶液

在搞分子生物学实验的时候,要想保护DNA和RNA的完整性,有个东西特别重要,就是无RNase的1M DTT溶液。DTT也就是二硫苏糖醇,是一种很强的还原剂。大家平时用它的地方可不少,比如搞RNA研究、蛋白质电泳,还有DNA或者RNA提取,它都能派上大用场。为了不让样本里的RNA被RNase给降解了,咱们必须得给它准备一份干干净净的DTT溶液才行。 有了这个无RNase的1M DTT溶液,就能帮着保持核酸和蛋白质的结构不受破坏。比如说在提取RNA的时候,咱们通常会先把1M的母液配成10mM或者100mM的浓度来用。因为DTT是强还原剂嘛,它能防止RNA在提取过程中被破坏掉。还有在做蛋白质电泳的时候,DTT可以去打断蛋白质内部的二硫键,让样品在跑电泳的时候保持变性的状态,这样就能把蛋白质的不同亚基分开了。 除了这个作用之外,DTT还能抓住金属离子,把RNA酶的活性给抑制住,这也是一种保护RNA的办法。操作的时候咱们一定要小心点,给移液器吸头和离心管都换上无RNase的配件。别去碰那些有RNase污染的表面,免得交叉感染了。 话说回来,DTT这东西放在溶液里特别容易被氧化。你要是发现溶液颜色从无色变成淡黄色了,就说明它的还原能力可能已经变差了,这时候得赶紧重新配一个才行。虽然说DTT的毒性比巯基乙醇要低一点,但最好还是带上手套和实验服,别让皮肤直接接触到它。 这个无RNase的1M DTT溶液算是分子生物学实验的基础试剂之一吧。它的制备步骤看着简单,但要想保证它无菌还得防污染,要求那是相当高的。只要咱们按规矩来操作保管好它,就能保证它的还原能力一直在线,从而保护好RNA样本的完整性。这样一来,后面的RT-PCR或者RNA测序这种下游实验才能顺顺利利地进行下去。