伊文思蓝染色液(2%),又叫Evans Blue Staining Solution,主要给神经科学和细胞生物学领域用的,能评估血脑屏障和细胞膜的完整性。它跟血浆白蛋白粘得很紧,所以可以看出血管的血脑屏障还有细胞的情况。伊文思蓝是一种大分子偶氮染料,分子量约为960.80 Da,它和血浆白蛋白有很强的亲和力。它会跟血浆中的白蛋白形成复合物,血管里就会变成蓝色。正常情况下,血脑屏障不让大分子白蛋白进入脑组织。但是如果血脑屏障坏了,这个复合物就能进去了,导致脑组织变成蓝色。它还能判断细胞是活的还是死的,因为它不能穿透完整的细胞膜。要是细胞膜破了或细胞死了,这个染料就能进去给它们染上淡蓝色。所以这个染料特别适合用来评估细胞活性。 这个染料主要用在三个方面:评估细胞死活、测量血容量、还有看血脑屏障受损情况。组织切片的时候用它来区分活细胞和死细胞,能定量分析死亡细胞数量和分布。还能通过测量它在体内的稀释度来计算动物的血容量。实验操作时给小鼠或大鼠静脉或腹腔注射伊文思蓝溶液。剂量要根据体重算好,一般是0.5%到1%的剂量(比如每公斤体重打4毫升)。注射完要让动物循环30到60分钟,让染料和血浆白蛋白充分结合渗透进去。时间到了之后要取组织切片观察结果。 实验操作规范是这样的:先注射伊文思蓝溶液给动物然后让它们循环一定时间,接着用生理盐水或者PBS灌流去除血管里的染料残留,然后立即取出大脑切成薄片用显微镜观察结果。要注意观察蓝色区域的大小和位置来判断血脑屏障受损程度还有细胞死亡情况。还可以用图像分析软件统计面积或者用化学方法提取染料测吸光度来计算渗透量。