做土壤亮氨酸氨基肽酶(Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP)检测,其实挺简单的,它主要是用分光光度法,试剂盒是50管/24样装的。做正事前,最好把3个差别比较大的样本拿出来先测测,这样能看看这套系统准不准。S-LAP这个酶特别爱水解N末端是亮氨酸的肽链,通常是土壤微生物分泌出来的。它活性的高低有时候能反映身体出了什么问题。它的工作原理是把L-亮氨酰对硝基苯胺分解成对硝基苯胺,后者在405nm波长的地方吸收光最强。我们就盯着吸光值上升的速度来算S-LAP的活性。你需要准备个可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL的玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂盒里有两种试剂:一种是65mL的液体装在瓶里,要存放在4℃;另一种是干粉状的,存放在-20℃。生化检测大概分六步:准备东西、配试剂、设参数、校准质控、测样品、算结果。具体做法如下: 第一步先做准备工作。检查试剂盒里的R1、R2、校准品、质控品是不是都在,有没有变质。从冰箱里拿出来后,先放在室温下(20到25度)平衡个5到30分钟,轻轻地摇一下备用。样品方面,确认它是不是符合检测要求,比如血清或者血浆是不是离心过了,组织匀浆是不是准备好了。如果样品需要稀释或者去干扰物,先提前处理好。仪器方面,看看生化分析仪或者酶标仪能不能用得上,开机预热一下,清理干净防止有脏东西残留。 第二步是配试剂。如果是那种现成能用的试剂,直接平衡室温就行了。如果是需要混在一起的,就得按照说明书上的比例比如4:1或者3:1把R1和R2混在一起。校准品要用指定的液体把浓度调好(通常有3到5个梯度)。 第三步是设仪器参数。按说明书上的要求和仪器型号来设检测方法(终点法、速率法还是两点法)、孵育温度(通常是37度)、反应时间。还要设好波长,比如450nm或者540nm是看产物吸收光最多的地方。如果有背景干扰的话还得设个副波长来修正一下。还要确定加多少试剂和多少样品的比例。 第四步是校准和质控。校准品配好后按顺序加到反应杯里按参数测一下,记录吸光度值或者变化率。然后用Spline拟合的方法把这些数据画成一条标准曲线。相关系数最好得大于0.990。质控品也要同时测高、中、低三个水平的看结果是不是在范围里。 第五步就是检测样品了。按照设定的比例把试剂和样品加进去顺序别弄错了。比如先加R1和样品孵育一下再补加R2。温度和时间控制好别反应过头或者没反应完。 最后一步是算结果和记录。把样品的吸光度值带入标准曲线算出浓度或者活性来记录下来还要注明曲线的相关系数和质控的情况方便以后查。 注意事项就不细说了有相关产品可以参考。