伊文思蓝染色液(2% )

伊文思蓝染色液(2%),也就是Evans Blue Staining Solution(2%),这东西在神经科学还有细胞生物学里面用得很多。它之所以管用,主要是因为能跟血浆白蛋白粘得特别紧。这样一来,咱们就能拿它来测血脑屏障是不是严实,或者细胞膜还活着不。 先来唠唠这染料咋回事儿。伊文思蓝也是叫偶氮蓝,那是个高分子量的偶氮染料,分子式写出来挺长,分子量大概960.80 Da。这东西在生理环境下跟血浆白蛋白特别亲热,一沾上皮就不走了。它就靠着这股劲儿在研究里派上了用场。 血浆白蛋白这方面嘛,伊文思蓝跟它一接触就能快速形成一个很稳定的复合物。因为这俩粘得太紧了,在血管里这复合物看着就是蓝色的液体。这正是它能当血液循环指示剂的底气。 至于血脑屏障的事儿,正常情况下这层屏障很严格,大分子的白蛋白根本进不去脑组织。要是血脑屏障没毛病,伊文思蓝-白蛋白复合物也就被挡在外面了,脑组织看着就是无色的。可要是这屏障破了——比如得了脑卒中或者被撞坏了——通透性变大了,这复合物就能跑进去把脑组织染成蓝色。所以你看染色的范围和深浅,就能知道血脑屏障伤得重不重。 还有看细胞死活的活儿,伊文思蓝也是把好手。这玩意儿是透不过细胞膜的。在细胞膜保护得好好的情况下,染料进不去细胞内部。但要是细胞膜破了——细胞死了或者正在凋亡——染料就能钻进去给细胞质和细胞核染上色,死细胞就显出淡蓝色来。这就成了评估细胞活没活、死没死的好工具。 靠着这些特点,伊文思蓝染色液(2%)在科研里用得很广。比如做细胞活性或者死亡的评估,咱们切个组织片就能看出来活的还是死的。因为染料只进死细胞,科学家就拿它来算算存活率、看看细胞死的地方都在哪。 再比如测血容量也能用它。利用染料在血液里的分布情况算稀释度,间接就能算出动物有多少血了,血液循环怎么样也能看出来。 操作起来也有讲究。一般用小鼠或者大鼠做实验。先得在尾巴静脉或者肚子里打一针伊文思蓝。药量得按着体重来算,通常是体重的0.5%到1%这么个量(比如每公斤体重打4毫升左右)。打完之后让动物多转悠30到60分钟让染料跟白蛋白好好结合并跑到该去的地方去。 到点了以后要把动物处理一下排除血管里没结合的染料残留。一般是用生理盐水(PBS)或者别的缓冲液把心脏灌一灌冲干净。灌完马上把大脑或者别的组织取出来切成薄片(大概30到50微米厚),准备用显微镜看。 看结果和分析数据是关键环节。先在显微镜下瞅一眼切片,染成蓝色的地方通常说明屏障破了或者细胞死了。接着用软件统计下染色的面积;或者把染料提取出来用光谱仪测一下吸光度(一般是610纳米波长),这样就能算出到底透进去了多少染料了。