如果你手里拿着一个淀粉分支酶(Starch branching enzyme,SBE)试剂盒,它其实是用分光光度法做的,里面装了50管试剂,能让你做24个样品。记住,在正式开始前,一定要先拿2到3个差异挺大的样本来做预测定,看看这试剂盒准不准。SBE(EC 2.4.1.18)主要长在植物里,是造支链淀粉的关键,测它的活性对搞懂淀粉是怎么造的,还有挑好品种改良品质都很有帮助。 测定原理很简单,直链淀粉和碘碰在一起会在660nm处有光吸收。SBE把直链淀粉变少了,淀粉-碘复合物在660nm的吸收值就下降了。只要看看在一定时间内吸光度降了百分之几,就能知道SBE有多活跃。你还得自己准备一些东西,像分光光度计、水浴锅、离心机、移液器、1毫升的玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂盒的储存条件有讲究:液态的酶工作液和显色剂要在2到8℃冷藏,别放冰箱门口结了冰;酶制剂、抗体这些活性高的成分要放在-20℃冷冻,最好分装一下别来回冻融;稀有酶或者荧光标记物这种敏感货得存到-80℃超低温冰箱里;干粉的稀释液就在室温15到25℃放着就行。不管是酶还是荧光探针,只要见光容易坏的东西都得避光存,用棕色瓶或者袋子包好。 为了防潮防污染,干粉试剂得放在湿度不超过60%的干燥地方放点干燥剂。开封了的试剂一定要马上密封好,防止被氧化或者长细菌;不同的试剂盒不要混在一起摆;标准品和核心试剂放一起保存;包被板也要密封着冷藏住涂层。 算结果的时候先把标准品和样本重复孔的平均值算出来(通常是OD值),把那些偏差超过10%的异常值给剔除掉。再用这些平均值减掉空白对照的平均值,得到校正后的信号值。画个标准曲线横坐标放浓度,纵坐标放校正信号值,用线性回归算个Y=aX+b出来。这个相关系数R2得大于等于0.99才行,不然得重做实验。 如果你做的是浓度类的检测(像代谢物或者离子),结果计算稍微简单点;如果是测酶活类的就稍微复杂点。最后说一句,这产品只能拿来做科研实验。