微生物检测主要分3个步骤，咱们先看看最开始的操作。第一步是把大量样本稀释成合适的浓度，比如把“大海”变成“泳池”。不管是固体、半固体还是液体，第一步都是得把样品稀释到能数清楚的程度。对于固体或者半固体的东西，通常称取25克样品放到一个有225毫升磷酸盐缓冲液或者生理盐水的无菌均质杯里，用均质机搅拌1到2分钟。如果用均质袋的话，直接拍打1到2分钟就行，这样就能得到1:10的样品匀液了。液体样品就更简单了，用吸管吸取25毫升原液，再倒到一个有225毫升稀释液和玻璃珠的锥形瓶里摇匀，同样得到1:10的样品匀液。做完了这一步之后，换成新的1毫升无菌吸管，沿着管壁把匀液慢慢地注入到9毫升稀释液里反复吹打或振摇制成1:100匀液。每增加10倍浓度，吸管跟吸头都得换新的，免得污染了。 根据样品污染情况的预估，咱们挑2到3个合适的稀释度来做后续的平板涂布。每个稀释度做两个平皿吧同时准备两个空白对照。 接下来就是倒培养基这步了，把温度控制在46摄氏度左右的平板计数琼脂培养基迅速倒进平皿里转动培养皿让培养基铺得均匀点。这一步对菌落散开很重要直接影响计数准不准。 然后是培养跟计数。一般的东西36摄氏度左右培养48小时左右就行了水产品可能得30摄氏度左右72小时。要是担心有菌在表面长好多没法分开可以在最底层覆盖点薄层培养基再翻转继续养。 等养好了肉眼观察一下加上放大镜或者计数器记录个数就行。原则是这样的：30到300 CFU/皿这个范围内的才算是有效小于30的就记具体数值超过300的就写“多不可计”每个稀释度都取两个平皿的平均数算结果。 最后是结果跟报告环节。所有平板都长漫了没法数直接报告“蔓延”。要是空白对照长菌了这次实验就作废了重量取样就按CFU/g算体积取样按CFU/mL算按上面这些步骤操作从稀释到计数每一步都要实实在在地落实到位才能拿到准确可靠的检测结果。